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                流动相的pH和缓冲液离子浓度对得到好處最多分离和色谱保留的影响

                点击:   作者:天友利标准光源有限公司      发布日期:2014-07-08
                用反相色谱分离酸性或碱性组分要求流动相为酸性或碱我應該相當于一級仙帝左右吧性,或者加入缓冲液。酸、碱和缓冲液的概念是一致的,但在HPLC的流动相中加酸、加碱的作用和加缓冲液的作用有些不同。 反相色谱的固定相是以烷烃链为主的非意思小唯還是不解极性键合相,加十八烷基硅烷(C18),对非极性组分你誤會了保留时间
                  用反相色谱分离酸性或碱性组分要求流动相为酸性或碱性,或者加入缓冲液。酸、碱和缓冲液的概念是一致的,但在HPLC的流动相中加酸、加碱的作用和加缓冲液的作用有些不同。
                  反相色谱的固定相是以烷烃链为主的非极性键合相,加十八烷基硅烷(C18),对非极性组分保留时對方间长,对极性组分保留时间短。
                  流动相的pH<7时,酸性腦袋分为游离型(RCOOH),极性小,碱性组分为离子型(RNH3.C1),极性大。酸性组分在色谱柱上保留时间长,能充分在固定相和流动相之间多次分配,使用权得组分彼此间※得以分离,增加组分的选择性。
                  若流相的pH>7时,碱性组分为游离型(RNH2),极性小,酸性组分为⊙离子型(RCOO-Na),极性大。有利于碱性组分的分离金仙五百四。
                  所以在分离酸性组分时流动相的pH<7,在分离碱性组分流动相的也就是所謂pH≥7。
                  分析带好東西有竣基(—COOH)的次甘草酸,用的是典型的反相HPLC,随着流动相的pH值减小,保留不断加大。
                  单纯用酸或碱调节流动相的pH值是比 八件仙器较极端的情况,除非混合样品中的组分是清一色的酸性组分更多更好無錯全小說或是清一色的碱性组分,一般不单加酸或单加碱。通常要▆分离的组分性质是多种多样的,必须采用缓和的、经得直冲击的缓冲液流动相。
                  HPLC常用的缓冲液是由下列三类缓ㄨ冲物质对配制的:乙酸、乙酸钠(pH=3~6);磷酸-磷酸盐(K+,Na+)pH=2~8);三羟甲基氨甲烷(Tris)-GC1(pH=7~9)。
                  磷酸-磷酸盐系列是硬酸盐,与有机溶剂(甲醇、乙腈)混合时哎容易析了出不易看到的细微晶体。过滤掉,流动相的強行把金剛斧收回了體內组成改变。不过滤,晶体伤泵、伤进样器、伤柱、伤检测器。如能满足实验条件,先选用软酸盐(乙酸盐、Tris系列)。
                  用缓冲液千万不要忘记冲洗干净。
                  一些离子型的组分在无缓冲液的流动相中会离解生成H+或OH-,组分在柱内形成谱带的那一部分引起流动相pH的变化,对色谱的分离产生神器影响。流动相内加了缓冲液使pH值的在一个范围内还会变化,而且应变力是□强大的,小小的组分离解引pH值的变化,而且应变力是强大的,小小的组分离解引起pH值的变化不足而后又看了看以改变整个流动的pH值。
                  例如分析一组酸性组分的样品:萘磺酸、肾上腺素、苯甲醇、去甲变肾上腺素。这些组分有的酸性强,有的酸性弱,有的呈两性。还是采用C18柱,磷酸盐冲液』-甲醇为流 鐺动相,如果缓冲物质对的浓度过低,4个组分间的分离差,色谱峰严惩扬长拖尾。提高缓冲液的冲物▽质对浓度上述缺点得到克服。